男女后进式猛烈xx00动态图片,久久成人无码国产免费播放,又小又紧女MAGNET,欧美成人片一区二区三区

技術中心

您現在的位置:環保在線 > 技術首頁 > 操作維修

瓊脂糖凝膠電泳的操作流程

2011年04月13日 17:24:38人氣:3585來源:上海華壹生物科技有限公司

瓊脂糖凝膠電泳的操作流程
準備干凈的配膠板和電泳槽 ,請注意DNA酶污染的儀器可能會降解DNA,造成條帶信號弱、模糊甚至缺失的現象。
選擇電泳方法
  一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。
正確選擇凝膠濃度
  對于瓊脂糖凝膠電泳,濃度通常在0.5~2%之間,低濃度的用來進行大片段核酸的電泳,高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎,小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。注意高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨,造成條帶缺失現象。
適合的電泳緩沖液
  常用的緩沖液有TAE和TBE,而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。電泳時使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。注意電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低,pH值上升,緩沖性能下降,可能使DNA電泳產生條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。
電泳的合適電壓和溫度
  電泳時電壓不應該超過20V/cm,電泳溫度應該低于30℃,對于巨大的DNA電泳,溫度應該低于15℃。注意如果電泳時電壓和溫度過高,可能導致出現條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象
DNA樣品的純度和狀態
  是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象DNA樣品的純度和狀態注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉淀可以去除多余的鹽,用酚可以去除蛋白。注意變性的DNA樣品可能導致條帶模糊和缺失,也可能出現不規則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對DNA樣品加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。
DNA的上樣
  正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊,而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。TIANGEN公司DNA分子量標準每次上樣6ul即可得到清晰均勻的條帶。
Marker的選擇
  DNA電泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正對照DNA來估計DNA片段大小。Marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的,這樣對目標片段大小的估計才比較準確。TIANGEN公司的DNA Marker條帶清晰,亮度均勻,質量穩定,是您實驗的。需要注意的是Marker的電泳同樣也要符合DNA電泳的操作標準。如果選擇λDNA/HindIII或者λDNA/EcoRI的酶切Marker,需要預先65℃加熱5min,冰上冷卻后使用。從而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接頭導致的片段連接不規則或條帶信號弱等現象。
凝膠的染色和觀察
  實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙啶(EB),染色效果好,操作方便,但是穩定性差,具有毒性。而其他系列例如SYBR Green,GelRed,雖然毒性小,但價格昂貴。TIANGEN公司的GeneGreen相比則是性價比高的低毒替代染料,其靈敏度比傳統EB染料高10倍以上。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長,如果激發波長不對,條帶則不易觀察,出現條帶模糊的現象。

全年征稿/資訊合作 聯系郵箱:hbzhan@vip.qq.com
版權與免責聲明
1、凡本網注明"來源:環保在線"的所有作品,版權均屬于環保在線,轉載請必須注明環保在線,http://www.rjcineplex.com。違反者本網將追究相關法律責任。
2、企業發布的公司新聞、技術文章、資料下載等內容,如涉及侵權、違規遭投訴的,一律由發布企業自行承擔責任,本網有權刪除內容并追溯責任。
3、本網轉載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品來源,并自負版權等法律責任。
4、如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。

上海華壹生物科技有限公司作者

我要投稿
  • 投稿請發送郵件至:(郵件標題請備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯系電話0571-87759680
環保行業“互聯網+”服務平臺
環保在線APP

功能豐富 實時交流

環保在線小程序

訂閱獲取更多服務

微信公眾號

關注我們

抖音

環保在線網

抖音號:hbzhan

打開抖音 搜索頁掃一掃

視頻號

環保在線

公眾號:環保在線

打開微信掃碼關注視頻號

快手

環保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關注
意見反饋