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液相色譜專業(yè)小知識集合

2019年03月28日 11:54:48人氣:1190來源:南京科捷檢測科技發(fā)展有限公司

流動相:

1、流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用,過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍;

2、水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長菌變質(zhì);

3、使用雙泵時,A、B、C、D四相中,若所用流動相中有含鹽流動相,則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動相,B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相;A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶,用于存放水相流動相。

樣品:

1、采用過濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒;

2、用流動相或比流動相弱(若為反相柱,則極性比流動相大;若為正相柱,則極性比流動相小)的溶劑制備樣品溶液,盡量用流動相制備樣品液;手動進(jìn)樣時,進(jìn)樣量盡量小,使用定量管定量時,進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3~5倍。

色譜柱:

1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書,注意適用范圍,如pH值范圍、流動相類型等;

2、使用符合要求的流動相;

3、使用保護(hù)柱;

4、 如所用流動相為含鹽流動相,反相色譜柱使用后,先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇沖洗;

5、 色譜柱在不使用時,應(yīng)用甲醇沖洗,取下后緊密封閉兩端保存;

6、 不要高壓沖洗柱子;

7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱。

液相色譜儀操作過程

1、開機(jī)操作:

① 打開電源,用Harb相連接時,注意Harb電源,打開計算機(jī),打開Bootp Server(一般啟動時已打開);

 

② 自上而下打開個組件電源,Bootp Server里顯示有信號時(有六行字符),打開工作站(先打開On line);

③ 打開沖洗泵頭的10%異丙醇溶液的開關(guān)(需用針捅抽),控制流量大小,以能流出的小流量為準(zhǔn);

④ 注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定,若設(shè)定的容積低于低限會自動停泵,注意洗泵溶液的體積,及時加液;

⑤ 使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài),及時正確處理各種突發(fā)事件。

2、 先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間(如所用流動相為含鹽流動相,必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相),正式進(jìn)樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈,以延長燈的使用壽命;

3、 建立色譜操作方法,注意保存為自己命名的Method,勿覆蓋或刪除他人的方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果;

4、 使用手動進(jìn)樣器進(jìn)樣時,在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒,洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑,進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上,并排除針筒中的氣泡;

5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎,在更換流動相時注意保護(hù),當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時,不可用超聲洗滌,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌;

6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上,再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈;

7、 關(guān)機(jī)時,先關(guān)閉泵、檢測器等,再關(guān)閉工作站,然后關(guān)機(jī),后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件,關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān);

8、 使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度,出現(xiàn)問題及時向老師報告,不要擅自拆卸儀器。

附常見故障排除方法

1、操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小,則可能管件連接有漏,注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯誤警告(各組件指示燈均為紅色),一般為漏液,其中一個感應(yīng)器中已有溶劑,漏液故障排除后,擦干,點(diǎn)擊On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再點(diǎn)擊操作界面中的Instrument/System On即可;

2、連接柱子與管線時,應(yīng)注意擰緊螺絲的力度,過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液,可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異,hao不要混用,必要時可使用PEEK管及活動接頭;

3、操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高,則可能管路已堵,應(yīng)先卸下色譜柱,然后用分段排除法檢查,確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞,可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗,還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡),若還是無法通暢,則需換柱;

4、運(yùn)行過程中自動停泵,可能為壓力超過上限或流動相用完;

5、樣品瓶中樣品較少,自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針無法到達(dá)液面,可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法,注意設(shè)置時不要使進(jìn)樣針碰到瓶底,微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;

6、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對準(zhǔn)時,需重新定位;

7、泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn),可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題,需更換;

8、基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡,若用離子對試劑,在使用使需要足夠的時間和溶劑體積,色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡),流動相被污染(更換流動相,清洗儲液器、過濾器,沖洗并重新平衡系統(tǒng)),色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱),檢測器不穩(wěn)定;

9、短期有規(guī)則的噪聲,可能原因?yàn)楸脡翰环€(wěn)或泵脈沖,調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問題),泵入口管路松或堵塞,泵太臟,泵柱塞磨損,檢測器不穩(wěn)定;

10、長期有規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)槭覝夭环€(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng);

11、基線漂移,可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或沒有達(dá)到化學(xué)平衡,室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱),流動相污染或分解,柱污染,檢測池泄漏,系統(tǒng)泄漏,固定相流失(另選流動相,另選色譜柱),測定的波長選擇錯誤(對溶劑有吸收),樣品組分保留太長(用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱),檢測器不穩(wěn)定;

12、每次進(jìn)樣時的保留時間不重復(fù),可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或未達(dá)到化學(xué)平衡,由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定,進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞,溶劑配比不合適,柱被污染;

13、無峰,可能原因?yàn)闄z測器選擇錯誤,使用錯誤的流動相,樣品降解;

14、色譜峰比預(yù)計的小,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積錯誤,檢測器燈故障,進(jìn)樣問題(瓶號錯、進(jìn)樣體積不合適、進(jìn)樣錯誤、針頭堵塞);

15、峰變寬,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高,過濾器、保護(hù)柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞,檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤,進(jìn)樣器問題(如閥漏、針頭堵塞或損壞),柱或保護(hù)柱被污染,對流動相來說樣品溶劑太強(qiáng),使用錯誤的色譜柱,溫度變化;

16、出現(xiàn)雙峰/肩峰,可能原因?yàn)楸Wo(hù)柱或柱入口部分阻塞,柱或保護(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效,進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載),平衡破壞;

17、前沿峰,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載),平衡破壞,對于流動相來說樣品溶劑非極性太強(qiáng)(對于反相柱),柱或保護(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效;

18、脫尾峰,可能原因?yàn)橹虮Wo(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效,進(jìn)樣器問題(如閥漏等),檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤;

19、出現(xiàn)鬼峰,可能原因?yàn)榱鲃酉啾晃廴荆瑯悠奉A(yù)處理時產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì),先前進(jìn)樣的流出物,樣品定量管清洗不當(dāng),注射器臟,柱被污染,進(jìn)樣裝置被污染,流動相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。

 

南京科捷專業(yè)生產(chǎn)研發(fā)氣相色譜儀,液相色譜儀,紫外線可見分光光度,頂空進(jìn)樣器,等多樣分析儀器以及配套產(chǎn)品,公司有著16年的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)!
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