293 HEK-293 (人胚腎細(xì)胞)

別稱Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:

MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

注意事項(xiàng)該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正常現(xiàn)象，請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。

參考資料(來(lái)源文獻(xiàn))

背景描述是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞，包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出，基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入19號(hào)染色體(19q13.2)。為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主，可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

年齡（性別）胎兒

組織來(lái)源腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化

細(xì)胞類型轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物安全等級(jí)BSL-2

倍增時(shí)間~24-30 hours

致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

受體表達(dá)情況vitronectin

保藏機(jī)構(gòu)ATCC; CRL-1573 ATCC： PTA-4488 DSMZ： ACC-305 ECACC： 85120602

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存

在沒(méi)有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測(cè)試。

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠骨髓造血干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠氣管軟骨細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠牙齦成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠外周血淋巴細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠腸系膜平滑肌細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠頸動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠胚胎肢芽間充質(zhì)干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠浦肯野細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠胚胎干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠牙髓干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠嗅球細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠陰道壁成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠髖臼軟骨細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

293 HEK-293 (人胚腎細(xì)胞) 小鼠腓腸肌細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠浦肯野細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠鞏膜成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠胚胎干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶