產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌血清型PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
Enterotoxigenic E.coli(ETEC)O139PCR | BJ-P6712 | 50T |
運(yùn)輸：低溫
保存：-20℃避光
有效期：一年
貨期：2-3周
產(chǎn)品用途：公司產(chǎn)品僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
試劑組成:
特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
操作流程：
RNA 提取 → 反轉(zhuǎn)錄 → 設(shè)計(jì)引物 → Q-PCR
一、 總RNA提取
A組織樣本：迅速將新鮮的組織切成合適的大小，在液氮中充分研磨后加裂解液裂解，或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1ml Trizol。
B全血樣品：加入3-5倍體積的紅細(xì)胞裂解液到血樣中，室溫孵育10min，室溫3500rpm離心6min。棄上清，原每2-3ml全血樣品加1mL Trizol。
C細(xì)胞樣品：懸浮液中生長(zhǎng)的細(xì)胞，通過(guò)離心收集細(xì)胞后，每1×105?106細(xì)胞加入1mL Trizol，移液器吹打混勻，直接裂解或-80℃儲(chǔ)存一個(gè)月。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，有兩種處理方法。一種是移除培養(yǎng)基后，將1mL Trizol直接加入直徑3.5cm的培養(yǎng)皿中裂解細(xì)胞。或是先用將貼壁細(xì)胞消化下來(lái)并收集后，再加入1mL Trizol進(jìn)行裂解。（Note：加入Trizol前, PBS充分洗滌細(xì)胞去除殘余培養(yǎng)基。）
二、直接法
1）加入1ml Trizol試劑，混勻，冰上孵育10min。
2）4℃，12000rpm離心10min，小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。
3）加入200ul氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育5min。
4）4℃，12000rpm離心15min。混合液分三層，包括最下面的氯仿有機(jī)相，中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管（大約60％體積的Trizol），不要吸取中間相，可留下少量上層液體！（Note：質(zhì)量比數(shù)量更重要！）
5）加入等體積的異丙醇，輕輕地顛倒混勻約10次，室溫放置10min。
6）4℃，12000rpm離心10min。棄上清，1ml 75％乙醇洗滌RNA沉淀兩次。
7）4℃，12000rpm離心5min，棄上清，室溫下風(fēng)干5-10min（不要太干，過(guò)度干燥會(huì)導(dǎo)致RNA難溶解！）。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8）立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，或先-80℃長(zhǎng)期保存。
公司正在出售的產(chǎn)品：
鋅指蛋白193封閉多肽 | 人皰疹病毒7型PCR試劑盒 |
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框18封閉多肽 | 人類嗜淋巴細(xì)胞病毒型前病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
轉(zhuǎn)錄因子E2F-3封閉多肽 | 腸出血性大腸桿菌血清型PCR檢測(cè)試劑盒 |
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框65封閉多肽 | 大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子PCR試劑盒 |
補(bǔ)體C1qTNF8鏈多肽封閉多肽 | 星狀病毒RT-PCR試劑盒 |
環(huán)指蛋白88封閉多肽 | 伊氏錐蟲(chóng)(TE)核suan檢測(cè)試劑盒 |
選擇性剪接因子3亞基3封閉多肽 | 大腸彎曲桿菌、海鳥(niǎo)彎曲桿菌16S rRNA基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)? |
脊髓性肌癥蛋白Gemin4封閉多肽 | 大鼠白血病病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
支架蛋白IQGAP2封閉多肽 | 液化沙雷菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2封閉多肽 | 等孢球蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
人血影蛋白(spectrin)試劑盒ELISA | 絲氨suan肽mei2甘露聚糖結(jié)合凝集suELISA試劑盒 |
人膽囊收縮su/腸促肽(CCK)elisa試劑盒 | F-肌動(dòng)蛋白ELISA試劑盒 |
人戊型肝炎病毒抗體(IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體ELISA試劑盒 |
產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌血清型PCR檢測(cè)試劑盒大鼠磷suan化乙酰羧化mei(pACCase)試劑盒 ELISA | Goosecoid2蛋白ELISA試劑盒 |
副雞禽桿菌PCR試劑盒 | Kell蛋白ELISA試劑盒 |
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽(γGT)比色法檢測(cè)試劑盒 | 海藻糖活性比色法檢測(cè)試劑盒 |
注意事項(xiàng):
1、所有步驟均應(yīng)在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，超凈臺(tái)紫外照射至少15min。
2、所有試劑應(yīng)為此實(shí)驗(yàn)專用。
3、使用75％乙醇或其他去污劑擦拭工作臺(tái)，避免表面污染。
4、進(jìn)入熒光定量PCR 操作實(shí)驗(yàn)室后需要佩戴一次性無(wú)菌口罩、無(wú)菌乳膠手套、實(shí)驗(yàn)中盡量避免與同事交談，防止PCR 模板污染。
5、實(shí)驗(yàn)中使用各種規(guī)格的離心管，槍頭及配制試劑和溶解沉淀用的水，均應(yīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）處理后使用，以去除吸附的RNA酶污染。
6、使用Trizol試劑時(shí)，避免接觸皮膚或衣服。避免吸入蒸氣。
7、qPCR反應(yīng)需要qPCR級(jí)水，試劑和試管。請(qǐng)務(wù)必使用正確類型的qPCR光學(xué)PCR管和蓋子。不可用普通的PCR管。
8、加樣前，先布局，規(guī)劃加樣順序以避免交叉污染。
9、所有實(shí)驗(yàn)應(yīng)均應(yīng)設(shè)置無(wú)模板對(duì)照，其中包含除DNA或cDNA樣品以外的所有反應(yīng)組分。
10、先配制qPCR反應(yīng)混合液，減少誤差。
11、加樣后上機(jī)前，務(wù)必通過(guò)瞬離將反應(yīng)液離至管底，并消除溶液中的氣泡，因?yàn)闅馀輹?huì)干擾熒光檢測(cè)且降低酶活性，從而降低擴(kuò)增效率。
