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小鼠胚胎成骨細胞前體細胞；MC3T3-E1

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公司名稱上海一研生物科技有限公司
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所在地上海市
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更新時間2021/4/1 14:35:49
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小鼠胚胎成骨細胞 MC3T3-E1 前體細胞

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小鼠胚胎成骨細胞前體細胞；MC3T3-E1 產品信息

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產品名稱	小鼠胚胎成骨細胞前體細胞；MC3T3-E1
生長特性	貼壁生長
貨號	EY-X63217

細胞名稱小鼠胚胎成骨細胞前體細胞；MC3T3-E1
形態特性: 成纖維細胞樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細胞有多個亞，可以作為體外研究成骨細胞分化的良好模型，尤其是ECM信號通路的作用。

培養條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法: 1:6~1:8傳代；2~3天1次。

傳代情況: C5

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 培養法（-）
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產品特點:
1、使用方便:不需昂貴設備。
2、可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率指數生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線取指數生的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。
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