操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：pRT20-T載體克隆試劑盒
英文名稱：pRT20-T vector
產(chǎn)品規(guī)格：20次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164562
生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
pRT20-T 載體是一種高效克隆PCR產(chǎn)物(TA Clonging)的專用載體。它是由pUC19載體改造成的(pRT20-T載體在pUC19質(zhì)粒MCS位點附近插入T7啟動子序列)，MCS位點經(jīng)過EcoR V酶切后在兩側(cè)的3’端添加”T”制備而成。因大部分Taq酶會在PCR產(chǎn)物的3’末端添加一個“A”，所以用本載體可以高效地進(jìn)行PCR產(chǎn)物克隆。 本載體在pUC19載體的基礎(chǔ)上對LacZ基因的編碼序列進(jìn)行了改造，加了重組菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB瓊脂平板上的顏色篩選，具有更明顯的藍(lán)色菌落顏色，大大降低了假陽性率。由于在MCS位點附近插入了T7啟動子序列，因此可以對插入DNA片段直接進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄實驗。 本載體在插入位點兩側(cè)各有一個BamH I位點，可以用BamH I直接酶切檢測重組子，簡化了檢測程序。按照標(biāo)準(zhǔn)連接體系計算(10μl體系用1μl載體)，本載體可至少使用20次。包裝內(nèi)含有了2×ligation solution，是混合有T4 連接酶，連接buffer以及連接增劑的MasterMix，使用方便，且能顯著提高連接效率。另外，包裝內(nèi)提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速檢測陽性克隆。 儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
pZERO載體克隆鑒定試劑盒
PCR產(chǎn)物末端平滑處理試劑盒
DNA產(chǎn)物磷酸化處理試劑盒
載體/DNA產(chǎn)物去磷酸化處理試劑盒
5’端銜接體（LINKER）連接試劑盒
L-山梨糖(標(biāo)準(zhǔn)品) L-(-)-Sorbose 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 雞L苯解氨酶(PAL)ELISA檢測試劑盒ChickenL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit 96T/48T
糖精鈉 水合物(標(biāo)準(zhǔn)品) Saccharin salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人5核苷酸酶(5-)試劑盒 Human 5-Nucleotidase,5- ELISA Kit
標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05000mol/L(0.1N)) Iodine solution 質(zhì)量規(guī)格：0.05000mol/L(0.1N) 英文名稱MouseMGβ2ELISAKit小鼠β2微球蛋白(MGβ2)規(guī)格：96T/48T
標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：水) Iodine solution 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑：水 冰凍切片組織CREB蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
鈧標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3) Scandium standard 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3 RatCompleme4,C4elisa大鼠補體蛋白4(C4)elisa規(guī)格：96T/48T
反式丁烯醛(standard for GC) (E)-2-Butenal 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa ，英文名： GM-CSF ELISA Kit
十二烷(Standard for GC,≥99.5% (GC)) Dodecane 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5% (GC) 大鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA檢測試劑盒RatMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit 96T/48T
正癸酸(Standard for GC,>99%(GC)) Decanoic acid 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC) 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP-5)試劑盒 Human LRP-5 ELISA Kit
己二酸二甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC)) Dimethyl adipate 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC) ratNoradrenaline,NAELISAKit大鼠去甲(NA)elisa規(guī)格：96T/48T
馬來酸二丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC)) Dibutyl maleate 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC) F.solaniRFLP基因分析試劑盒20
pRT20-T載體克隆試劑盒噁啉 Sulfaquinoxaline 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Human1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T
Sulfalozine 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA檢測試劑盒Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPGELISAKit 96T/48T
泰妙菌素 Tiamulin 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA檢測試劑盒Human1,5-anhydroglucitol,1,5-AGELISAKit 96T/48T
化銫(用于高通量質(zhì)譜,99.9995%) Cesium iodide 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于高通量質(zhì)譜,99.9995% 人11-脫氧試劑盒 Human 11-Deoxycoisol ELISA Kit
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC)) 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinone 質(zhì)量規(guī)格：用于GC-HS,≥99.8%(GC) 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA檢測試劑盒Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETEELISAKit 96T/48T
二甲基亞砜(農(nóng)殘級) Dimethyl sulfoxide 質(zhì)量規(guī)格：農(nóng)殘級 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)試劑盒 Human 12-hydroxyeicosateaenoic acid,12-HETE ELISA Kit
十二烷基三甲基氯化銨（DTAC）(99%,離子對色譜級) Dodecyltrimethylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格：99%,離子對色譜級 人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)試劑盒 Human 12-lipoxygenase,LOX-12 ELISA Kit
二十酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC)) Methyl Arachidate 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC) 人14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)試劑盒 Human YWHAB ELISA kit
聚酰胺粉(柱層析用) Polyamide 質(zhì)量規(guī)格：柱層析用 人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)試劑盒 Human 15-epi-Lipoxin A4,15-epi-LXA4 ELISA Kit
聚酰胺粉(柱層析用，200-400目) Polyamide 質(zhì)量規(guī)格：柱層析用，200-400目 人15-羥基前列脫氫酶(15-PGDH)試劑盒 Human 15-PGDH ELISA Kit
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
